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药物研究:银杏外种皮多糖免疫活性研究/图

2009/5/26/09:28 来源:首席医学网 作者:陈光晖 佟继铭 刘玉玲 宋利萍

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   【慧聪制药工业网】 植物活性多糖具有多种重要的生理功能,主要有诱导体内免疫物质产生、提高机体的免疫作用、抑制肿瘤的生长和扩散、降血糖和降血脂等作用。近年来研究表明,银杏外种皮未脱蛋白粗多糖具有杀死肿瘤细胞、增加SOD的形成、提高机体免疫细胞活性和增强机体免疫功能等作用[1~4],但是关于脱蛋白银杏外种皮多糖的活性研究未见报道。本文研究了银杏外种皮粗多糖和脱蛋白多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响,以期为银杏外种皮多糖的研究开发提供科学理论依据。

银杏

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    1器材

    1.1仪器贝克曼DU640型紫外分光光度计,美国贝克曼库尔特公司;隔水式电热水浴箱,杭州蓝天化验仪器厂;BH-2型OLYMPUS显微镜,日本奥林巴斯;蔡氏荧光显微镜,德国蔡氏公司。

    1.2材料与试剂银杏外种皮未脱蛋白粗多糖,用GBEP-1表示,多糖含量为38.49%;脱蛋白银杏外种皮粗多糖,用GBEP-2表示,多糖含量为42.80%,两者均为本实验室制备;小鼠(清洁级KM小鼠),购于上海斯莱克实验动物有限责任公司,合格证号:SCXK(沪)2002-0010号,饲养环境为清洁级,合格证号:SYXK(苏)2002-0007;环磷酰胺粉剂(CTX),江苏恒瑞医药股份有限公司;黄芪注射液,成都地奥九泓制药厂;生理盐水(氯化钠注射液),南京小营制药厂;肝素钠注射液,江苏万邦生化医药股份有限公司;姬姆萨染液,南京建成生物工程研究所。

    5%鸡红细胞悬液:由市售肉鸡采血约10ml,以肝素生理盐水抗凝,再按1∶1加入注射用0.9%NaCl溶液,充分混匀洗涤后,3000r/min离心15min,弃去上清液,余下的红细胞再洗涤2~3次。取洗净离心后的红细胞4ml,用0.9%NaCl溶液配制成5%浓度,现配现用[5~7]。10%补体:取5只不同窝的豚鼠血,分离并合并血清,用生理盐水将血清配成10%浓度保存备用。

    2方法

    2.1小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验取小鼠70只,体重18~22g,随机分为7组,每组10只,♀♂各半,分别为正常组和CTX模型组(蒸馏水20ml/kg),阳性药黄芪注射液组(0.1ml/只),GBEP-1大、小剂量组(300,100mg/kg),GBEP-2大、小剂量组(300,100mg/kg)。除阳性药组(肌肉注射)外,各组动物灌胃(ig)给药,给药剂量均为20ml/kg,每日ig1次,连续给药7d,第5天除正常对照组外,每组动物腹腔注射CTX40mg/kg(0.1ml/10g),第6天各重复注射1次。于最后1次给药后1h,每鼠腹腔注射5%鸡红细胞混悬液0.5ml/只,给鸡红细胞后2h,处死小鼠。按文献[5,6]方法测腹腔巨噬细胞吞噬功能,按如下公式计算得吞噬百分率和吞噬指数。

    吞噬百分率(%)=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数200个巨噬细胞×100%

    吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞数200个巨噬细胞

    2.2小鼠溶血素抗体生成实验及对免疫器官的影响取小鼠70只,体重18~22g,随机分为7组,每组10只,♀♂各半。分别为正常组和CTX模型组(蒸馏水20ml/kg)、阳性药黄芪注射液组(0.1ml/只)、GBEP-1大、小剂量组(300,100mg/kg),GBEP-2大、小剂量组(300,100mg/kg)。除阳性药组(肌肉注射)外,各组动物灌胃(ig)给药。给药剂量均为20ml/kg,每日ig1次,连续给药12d,于给药后第5天各组动物腹腔注射5%鸡红细胞悬液0.2ml/只进行免疫,于给药后10d除正常对照组外,每组动物腹腔注射CTX40mg/kg(0.1ml/10g),第11天重复注射1次,末次给药后2h,小鼠眼眶后静脉丛取血,按文献[5~7]方法测溶血素形成。脱颈处死取血后的小鼠,称其体重,然后取其胸腺和脾脏称重,计算胸腺系数和脾脏系数。

    

    

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